自從阿伯拉罕（克里斯·克里斯托弗森飾）被吸血鬼綁架后，日行者刀鋒（韋斯利·斯奈普斯飾）持續追蹤其下落，最終在東歐將其救出。這段期間，刀鋒與人類武器專家斯加德建立合作關系。吸血鬼長老因新型變種生物"收割者"的出現被迫求和——該物種以人類與吸血鬼為共同獵物，其失控的新陳代謝使其捕食頻率遠超常規。在長老之女內紗（蕾奧娜·維埃拉飾）的引薦下，刀鋒聯合吸血鬼精英部隊"血幫"展開圍剿行動，并與亞洲刺客雪人（甄子丹飾）建立臨時同盟。隨著調查深入，發現收割者實為吸血鬼研究員艾瑞克·布魯克斯通過基因實驗制造的產物，而內紗的真實目的是借助刀鋒之力復活收割者之父。最終刀鋒識破陰謀，與人類軍隊及反叛吸血鬼勢力聯手，在摧毀布魯克斯實驗室的同時終結了收割者的進化鏈，迫使兩大對立種族首次達成真正的停戰協議。