羅格（本·懷特配音）與阿尼塔（麗莎·戴維斯配音）夫婦飼養的大麥町狗龐哥（羅德·泰勒配音）與帕蒂塔（凱特·鮑爾配音）喜結良緣，誕下十五只幼崽。當全家正沉浸在新生犬群的歡樂中時，阿尼塔的女上司克魯拉·德維爾（貝蒂·洛烏·格爾森配音）為獲取黑白斑點皮毛制作大衣，暗中綁架了這窩幼犬并另尋八十四只同類幼犬，統一囚禁于鄉間空置莊園。察覺異狀的龐哥與帕蒂塔通過犬類特有的吠叫通訊系統召集全城狗群，借助動物間的信息網絡鎖定克魯拉藏匿幼犬的地點。經歷重重險阻后，兩只成年犬成功潛入莊園，在其他囚困幼犬的配合下以集體行動干擾綁匪，最終于暴風雨夜將全部一百零一只斑點狗安全轉移。次日清晨，克魯拉因非法囚禁及虐待動物遭警方逮捕，《101忠狗》作為迪士尼1961年推出的第17部經典動畫，改編自Dodie Smith的原著作品。